經(jīng)皮水分流失測量儀：副干乳桿菌與酵母菌混合培養(yǎng)物的免疫調(diào)節(jié)作用

2025年，Tomoki Fukuyama團隊在《Biomedcines》期刊上發(fā)表了一項題為“Topical Administration of a Mixed Microbial Culture of Lactobacillus paracasei,Pichia membranifaciens and Saccharomyces cerevisiae Significantly Inhibits the Development of Atopic Dermatitis in a Mouse Model Through IL-10 over Expression by Dendritic Cells"的研究。該研究探討了由副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母組成的混合微生物培養(yǎng)物（LS）對特應性皮炎（AD）小鼠模型的影響，重點評估其免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。

摘要

背景：本研究聚焦于一種由副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母組成的混合微生物培養(yǎng)物（LS）作為新型益生菌，探討其在特應性皮炎（AD）小鼠模型中通過皮膚給藥的療效。

方法：使用小鼠樹突狀細胞系（DC2.4）檢測LS的免疫調(diào)節(jié)作用，測定IL-10和TNFα的水平。在刺激狀態(tài)下的人表皮角質(zhì)形成細胞（HaCaT）中，評估LS對IL-8和TARC產(chǎn)生的抑制作用。最后，在通過局部致敏誘導的AD小鼠模型中，觀察LS（10%）局部給藥的干預效果。結(jié)果：LS顯著促進DC2.4細胞分泌IL-10和TNFα，并顯著抑制HaCaT細胞中IL-8和TARC的產(chǎn)生。在AD小鼠模型中，LS雖未顯著改善臨床癥狀，但降低了局部淋巴結(jié)中IgE陽性B細胞數(shù)量和IL-4水平。預防性使用LS可明顯減輕AD癥狀。

結(jié)論：LS具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，可用于預防AD的發(fā)生。

材料與儀器

材料：副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母、釀酒酵母混合培養(yǎng)物、細胞系、培養(yǎng)基、胎牛血清（FCS）、青霉素-鏈霉素、重組人TNFα、IFNγ、ELISA試劑盒、抗體

儀器：流式細胞儀、細胞計數(shù)儀、ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN經(jīng)皮水分流失測量儀

ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN經(jīng)皮水分流失測量儀

實驗過程

1 細胞實驗

使用小鼠樹突狀細胞系（DC2.4）和人表皮角質(zhì)形成細胞系（HaCaT）進行體外實驗。將DC2.4細胞與不同濃度（0-1 mg/mL）的LS混合微生物培養(yǎng)物共培養(yǎng)，檢測IL-10和TNFα的分泌水平。將HaCaT細胞先用TNFα和IFNγ刺激1小時，再加入不同濃度的LS共培養(yǎng)24小時，檢測IL-8和TARC的分泌水平。所有細胞因子濃度均使用ELISA試劑盒測定。

2 動物實驗

使用NC/Nga小鼠建立特應性皮炎（AD）模型，通過涂抹屋塵螨提取物（Biostir AD）誘導皮炎。實驗分為治療性實驗和預防性實驗兩部分：

治療性實驗：從AD誘導后第19天開始，每日在小鼠背部皮膚涂抹10% LS溶液（0.1 mL/只），對照組涂抹蒸餾水。每周評估AD臨床評分、背部皮膚厚度和經(jīng)皮水分流失量（TEWL）。

圖1 在預防性實驗中，與AD對照組相比，LS局部給藥降低了（A）AD臨床評分，但（B）皮膚厚度和（C）經(jīng)皮水分流失量（TEWL）未見變化。（D）皮膚病變的代表性宏觀圖像和（E）受累皮膚的組織學切片（比例尺 = 100 μm）。LS給藥減少了耳廓淋巴結(jié)中（F）CD3+CD4+CD44+CD62L?效應T細胞的數(shù)量，但對（G）CD19+IgE+ B細胞或（H）CD11c+樹突狀細胞無影響。細胞因子方面，（I）IL-4水平降低，而（J）IL-13和（K）IL-17水平未見變化。數(shù)據(jù)以平均值±標準誤（SEM）表示。各組樣本量：未處理組（n = 1），AD對照組（n = 6），LS處理組（n = 7）。** p < 0.01（Student's t檢驗）與AD對照組比較。AD，特應性皮炎；TEWL，經(jīng)皮水分流失量。

預防性實驗：在AD誘導前即開始每日涂抹10% LS溶液，后續(xù)監(jiān)測指標同治療性實驗。

3 樣本分析

實驗結(jié)束后，收集小鼠耳廓淋巴結(jié)，制備單細胞懸液。使用流式細胞儀分析T細胞、B細胞和樹突狀細胞的亞群變化。將淋巴結(jié)細胞用CD3/CD28磁珠刺激24小時，收集上清液檢測IFNγ、IL-4、IL-13和IL-17水平。同時取背部皮膚進行組織病理學檢查，評估表皮增生、角化、結(jié)痂及炎癥細胞浸潤程度。

4 數(shù)據(jù)分析

體外實驗使用方差分析（ANOVA）后接Dunnett檢驗，體內(nèi)實驗使用Student's t檢驗或雙因素ANOVA后接Sidak檢驗。p < 0.05視為有統(tǒng)計學意義。數(shù)據(jù)以平均值±標準誤（SEM）表示，使用GraphPad Prism 10軟件分析。

實驗結(jié)論

LS通過上調(diào)樹突狀細胞的IL-10表達，表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。在AD小鼠模型中，預防性局部使用LS可抑制AD癥狀的發(fā)展，提示其在人類和伴侶動物中具有預防AD的潛力。

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