Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀探究豚鼠下唇副交感舒血管纖維是否存在

《Journal of Comparative Physiology B》的一項研究中，來自北海道醫(yī)療大學(xué)口腔生物學(xué)系生理學(xué)分部的H. Ishii團隊發(fā)表了題為《Occurrence of parasympathetic vasodilator fibers in the lower lip of the guinea-pig》的研究。該研究聚焦于豚鼠下唇副交感舒血管纖維的存在與否及其起源問題，通過電刺激舌神經(jīng)、藥物干預(yù)及逆行神經(jīng)追蹤等方法，系統(tǒng)驗證了該纖維的存在性并探究其起源部位。

摘要

本研究旨在探究豚鼠下唇是否存在副交感舒血管纖維。電刺激豚鼠舌神經(jīng)的中樞切斷端，可引發(fā)下唇血流量和全身動脈血壓（SABP）呈強度和頻率依賴性下降。實驗前24小時皮下注射節(jié)后交感神經(jīng)阻滯劑兼抗高血壓藥物胍乙啶（30mg/kg），可降低全身動脈血壓的下降幅度，而舌神經(jīng)刺激僅在刺激同側(cè)引發(fā)下唇血流量呈強度和頻率依賴性增加。在經(jīng)胍乙啶預(yù)處理的豚鼠中，舌神經(jīng)刺激引發(fā)的下唇血流量增加可被自主神經(jīng)節(jié)膽堿能阻滯劑六甲銨以劑量依賴性方式抑制。當(dāng)下唇注射逆行神經(jīng)示蹤劑熒光金（Fluoro-gold）后，在同側(cè)耳神經(jīng)節(jié)中觀察到標(biāo)記神經(jīng)元。本研究表明，豚鼠下唇存在源自耳副交感神經(jīng)節(jié)的副交感舒血管纖維，這與先前在大鼠、貓、兔和人類中報道的結(jié)果相似。

關(guān)鍵詞：副交感舒血管纖維；副交感血管舒張；豚鼠；下唇血流量；三叉神經(jīng)

實驗材料與儀器

實驗材料

1. 實驗動物：雄性Hartley豚鼠

2. 藥物：胍乙啶、六甲銨、10%烏拉坦、泮庫溴銨、2%熒光金（Fluoro-gold，FG）、0.9%生理鹽水、0.1M磷酸鹽緩沖液、4%多聚甲醛、30%蔗糖溶液。

3. 試劑：用于組織固定和切片的相關(guān)試劑，包括明膠包被玻片等。

實驗儀器

雙極銀電極、電刺激器、二氧化碳監(jiān)測儀、呼吸機、加熱墊、微量注射泵、冷凍切片機、熒光顯微鏡、Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀

實驗過程

1.動物準(zhǔn)備

2.舌神經(jīng)電刺激

分離左側(cè)舌神經(jīng)并切斷，使用雙極銀電極連接電刺激器，對舌神經(jīng)中樞切斷端進行單側(cè)電刺激。

3.指標(biāo)測量

1. 全身動脈血壓（SABP）測量：股動脈插管，通過壓力傳感器記錄SABP，借助心率計監(jiān)測心率。

下唇血流量測量：使用Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀監(jiān)測雙側(cè)下唇血流量，探頭輕貼下唇且不施加壓力，通過八通道圖表記錄儀以10mm/min速度連續(xù)記錄，通過圖表上的反應(yīng)高度評估血流量變化，唇血管傳導(dǎo)率=平均血流量變化/平均SABP。

Omegawave FLO-C1激光多普勒血流儀

胍乙啶預(yù)處理與未預(yù)處理豚鼠中，左側(cè)舌神經(jīng)刺激的強度及頻率依賴性效應(yīng)對雙側(cè)唇部血管傳導(dǎo)性（a、c）和全身動脈血壓（SABP）（b、d）的影響

4.藥物處理

1. 胍乙啶預(yù)處理：實驗前24小時給豚鼠皮下注射30mg/kg胍乙啶，以減弱交感神經(jīng)系統(tǒng)對下唇血流量的影響。

2. 六甲銨干預(yù)：給經(jīng)胍乙啶預(yù)處理的豚鼠靜脈注射1mg/kg或10mg/kg六甲銨，30分鐘后重復(fù)舌神經(jīng)電刺激，計算給藥后反應(yīng)幅度與給藥前對照反應(yīng)的百分比。

5.軸漿運輸研究

1. 熒光金注射：豚鼠腹腔注射麻醉后仰臥，用微量注射泵以1μL/min速度向下唇左側(cè)注射10μL 2%熒光金溶液，注射深度1mm，注射后留針2分鐘避免回流。

2. 組織處理：注射后4天，深度麻醉豚鼠，先灌注200ml 0.1M磷酸鹽緩沖的0.9%生理鹽水，再灌注500ml 4%多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖液；取出耳神經(jīng)節(jié)、翼腭神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)，在4℃、含30%蔗糖的0.1M磷酸鹽緩沖液中保存1天，隨后用冷凍切片機切成40μm切片，貼于明膠包被玻片上。

3. 觀察：通過熒光顯微鏡觀察熒光金標(biāo)記的神經(jīng)元。

實驗結(jié)論

1. 未預(yù)處理的豚鼠中，舌神經(jīng)電刺激（電壓>5V或頻率>5Hz）可引發(fā)SABP明顯下降，雙側(cè)下唇血流量呈強度和頻率依賴性下降，且雙側(cè)血流量下降幅度無明顯差異。

2. 經(jīng)胍乙啶預(yù)處理后，舌神經(jīng)電刺激對SABP無明顯影響，但引發(fā)同側(cè)下唇血流量呈強度和頻率依賴性增加，對側(cè)無明顯變化，且血流量增加與SABP變化無關(guān)聯(lián)。

3. 六甲銨可劑量依賴性抑制胍乙啶預(yù)處理后舌神經(jīng)刺激引發(fā)的同側(cè)下唇血流量增加（1mg/kg劑量時為對照的47.3±9.7%，10mg/kg劑量時為11.7±11.7%）。

4. 下唇注射熒光金后，在同側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)（下頜支）和耳神經(jīng)節(jié)中觀察到球形或橢圓形標(biāo)記神經(jīng)元，翼腭神經(jīng)節(jié)中未發(fā)現(xiàn)標(biāo)記神經(jīng)元。

5. 綜上，豚鼠下唇存在源自耳副交感神經(jīng)節(jié)的副交感舒血管纖維，與大鼠、貓、兔和人類的相關(guān)發(fā)現(xiàn)一致。

返回列表