利用IITC MRBP鼠尾血壓測量儀探究萊菔子水煎液的降壓作用及代謝機(jī)制

山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗中心高世杰團(tuán)隊在《時珍國醫(yī)國藥》2022年第33卷第4期發(fā)表研究，采用糞便代謝組學(xué)方法考察萊菔子水煎液對自發(fā)性高血壓大鼠的降血壓作用及糞便代謝物影響，分析相關(guān)代謝通路，為萊菔子降壓機(jī)制提供實驗依據(jù)。

摘要

目的：探討萊菔子水煎液對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）的降壓作用及其對SHR糞便代謝物的影響，分析特征代謝物可能涉及的代謝通路，為探索萊菔子降壓機(jī)制提供實驗依據(jù)。

方法：選用8周齡雄性SHR，隨機(jī)分為模型組和萊菔子水煎液組，以8周齡雄性Wistar-Kyoto（WKY）大鼠為對照，灌胃6周后采集大鼠糞便，采用液相色譜-質(zhì)譜法采集糞便代謝物數(shù)據(jù)，利用SIMCA-P14.0、MetaboAnalyst4.0等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

結(jié)果：萊菔子水煎液對SHR有明顯降壓作用（P<0.05），并調(diào)節(jié)糞便中亞油酸、尿香草苦杏仁酸、鵝去氧膽酸等代謝物水平，相關(guān)代謝通路包括亞油酸代謝通路、苯丙氨酸代謝通路、卟啉與葉綠素代謝通路、花生四烯酸代謝通路等。

結(jié)論：萊菔子水煎液具有確切的降壓作用，可改變SHR內(nèi)源性代謝物。

材料與儀器

實驗動物

8周齡雄性SHR大鼠14只，體質(zhì)量（200±20）g；8周齡雄性SPF級WKY大鼠7只，體質(zhì)量（200±20）g

實驗藥材

萊菔子，經(jīng)鑒定為十字花科植物蘿卜的干燥成熟種子

實驗儀器

屹立高速粉碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（YRE-501型）、IITC MRBP 10通道大小鼠尾血壓測量儀、冷凍離心機(jī)、53050型真空濃縮儀、超聲波清洗器、UltiMate 3000超高效液相色譜儀

IITC MRBP鼠尾血壓測量儀

實驗試劑

乙腈、甲醇（純度≥99.9%）、甲酸（LC-MS級）、2-氯苯丙氨酸（純度≥98.5%）、甲酸銨（純度≥99.9%）、超純水

實驗過程

動物分組：14只SHR適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為萊菔子水煎液組和模型組，每組7只；7只WKY大鼠作為對照組。

萊菔子水煎液制備：萊菔子粉碎至50目，稱取180g加蒸餾水浸泡30min，微沸煎煮30min，過濾后濾渣再次煎煮，合并濾液旋蒸濃縮定容至200ml。

給藥干預(yù)：萊菔子水煎液組按9g·kg?1·d?1生藥量灌胃，模型組與對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)給藥6周。

血壓測量：采用IITC MRBP 10通道大小鼠尾血壓測量儀，每周測量大鼠尾動脈血壓1次，連續(xù)6周，每次測量3次取平均值。

樣品制備：給藥6周后采集新鮮糞便，-80℃保存；糞便樣本加2-氯苯丙氨酸甲醇溶液研磨、超聲、離心，取上清過濾后用LC-MS檢測。

檢測條件：采用超高效液相色譜儀配合Q Exactive質(zhì)譜儀，正負(fù)離子電離模式，設(shè)置對應(yīng)色譜梯度與質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行檢測。

數(shù)據(jù)處理：原始數(shù)據(jù)經(jīng)格式轉(zhuǎn)換、峰識別等處理后，進(jìn)行PCA、OPLS-DA多元統(tǒng)計分析，篩選VIP>1.0的潛在差異離子，結(jié)合數(shù)據(jù)庫鑒定差異代謝物，富集分析相關(guān)代謝通路。

實驗結(jié)論

1.萊菔子水煎液對自發(fā)性高血壓大鼠具有明顯降血壓作用（P<0.05），干預(yù)6周后降壓效果明確。

2.萊菔子水煎液可調(diào)節(jié)SHR糞便中17種差異代謝物水平，包括亞油酸、尿香草苦杏仁酸、鵝去氧膽酸等。

3.萊菔子降壓作用與6條關(guān)鍵代謝通路密切相關(guān)，分別為亞油酸代謝、苯丙氨酸代謝、卟啉與葉綠素代謝、花生四烯酸代謝、賴氨酸的降解、嘧啶的代謝。

4.萊菔子可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、能量代謝及血管舒張相關(guān)代謝物，發(fā)揮降低血壓的藥理效應(yīng)。

參考文獻(xiàn)

1.趙建敏.萊菔子治療高血壓病70例臨床觀察[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報,1999,14(3):13.

2.李鐵云,李天國,張國俠,等.萊菔子水溶性生物堿對自發(fā)高血壓大鼠降壓作用的實驗研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,2(1):25.

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