外用副干酪乳桿菌培養(yǎng)物對(duì)特應(yīng)性皮炎小鼠模型的干預(yù)研究

2025年10月，麻布大學(xué)獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室等在《Biomedicines》期刊上發(fā)表了一項(xiàng)研究。該研究以副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei）、膜畢赤酵母和釀酒酵母的混合微生物培養(yǎng)物（LS）為新型益生菌，探討了外用LS對(duì)特應(yīng)性皮炎（AD）小鼠模型的治療和預(yù)防效果，并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究了其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。

摘要

背景/目的

本研究聚焦于副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母的混合微生物培養(yǎng)物（LS）這一新型益生菌，旨在探討外用LS對(duì)特應(yīng)性皮炎（AD）小鼠模型的治療和預(yù)防效果。

方法

通過(guò)檢測(cè)白細(xì)胞介素（IL）-10和腫瘤壞死因子（TNF）α水平，在小鼠樹突狀細(xì)胞系（DC2.4）中研究LS的免疫調(diào)節(jié)作用；通過(guò)關(guān)注IL-8和胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC）的產(chǎn)生，在受刺激的人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）中評(píng)估LS的抗炎作用；最后，在通過(guò)局部致敏塵螨軟膏建立的AD小鼠模型中，考察10% LS外用的治療和預(yù)防效果。每周監(jiān)測(cè)臨床癥狀、背部皮膚厚度和經(jīng)表皮水分流失（TEWL），尸檢后分析耳后淋巴結(jié)的免疫反應(yīng)。

結(jié)果

LS處理增強(qiáng)DC2.4細(xì)胞分泌IL-10和TNFα；與LS共培養(yǎng)后，受刺激的HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生的IL-8和TARC減少。在AD小鼠模型的治療設(shè)置中，雖然臨床癥狀、皮膚厚度和TEWL無(wú)明顯變化，但LS治療組局部淋巴結(jié)中IgE陽(yáng)性B細(xì)胞數(shù)量和IL-4水平降低；與AD對(duì)照組小鼠相比，LS預(yù)防治療減輕了AD癥狀。

結(jié)論

研究結(jié)果表明，LS的免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用可預(yù)防AD的發(fā)生發(fā)展。

實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1. 實(shí)驗(yàn)材料

混合微生物培養(yǎng)物（LS）

細(xì)胞系：小鼠樹突狀細(xì)胞系、人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞系

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：NC/Nga小鼠

試劑：10%胎牛血清、青霉素-鏈霉素、重組人TNFα、干擾素（IFN）γ、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒、單克隆抗體（PE/Cyanine7偶聯(lián)抗小鼠CD3、PE偶聯(lián)抗小鼠CD4等、小鼠T激活劑CD3/CD28磁珠、Biostir AD（塵螨提取物）、4%十二烷基硫酸鈉溶液

2. 實(shí)驗(yàn)儀器

CellDrop™細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)

BD FACSAria™III細(xì)胞分選儀

ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x

實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1. 體外實(shí)驗(yàn)

• DC2.4細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將70%匯合度的DC2.4細(xì)胞（1×10?個(gè)細(xì)胞/100μL）接種到96孔培養(yǎng)板中，暴露于不同濃度的LS，通過(guò)ELISA定量檢測(cè)上清液中IL-10和TNFα的濃度。

• HaCaT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將70%匯合度的HaCaT細(xì)胞（1×10?個(gè)細(xì)胞）接種到含100μL培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，用重組人TNFα和IFNγ刺激1小時(shí)后，加入100μL不同濃度的LS，孵育24小時(shí)，通過(guò)ELISA定量檢測(cè)上清液中IL-8和TARC的濃度。

2. 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

• AD小鼠模型建立：通過(guò)局部致敏Biostir AD（塵螨提取物）并局部應(yīng)用4%十二烷基硫酸鈉溶液，在NC/Nga小鼠中建立AD模型。

• 給藥方案：治療組從AD發(fā)病后第19天（平均AD評(píng)分為2.07）至第33天，每日局部涂抹0.1mL/只10% LS溶液（n=8）或蒸餾水溶媒（n=7）；預(yù)防組從第0天至第18天（AD誘導(dǎo)前）進(jìn)行局部給藥。

• 指標(biāo)監(jiān)測(cè)：實(shí)驗(yàn)期間每周監(jiān)測(cè)一次TEWL、背部皮膚厚度和臨床評(píng)分（0-4分，分別對(duì)應(yīng)無(wú)癥狀、輕度、中度、重度、極重度）。

ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x

• 樣本收集與分析：最后一次致敏后1天，收集小鼠耳后淋巴結(jié)（LN），制備單細(xì)胞懸液并計(jì)數(shù)；通過(guò)BD FACSAria™III細(xì)胞分選儀分析細(xì)胞表型；將淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液（5×10?個(gè)細(xì)胞/孔）與小鼠T激活劑CD3/CD28磁珠孵育24小時(shí)，ELISA檢測(cè)上清液中IFNγ、IL-4、IL-13和IL-17水平；對(duì)皮膚樣本進(jìn)行盲法半定量組織病理學(xué)評(píng)估，采用0-3分制（0為正常，1為輕度，2為中度，3為重度）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

體外實(shí)驗(yàn)中，LS處理增強(qiáng)DC2.4細(xì)胞分泌IL-10和TNFα，且能減少受刺激HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生IL-8和TARC，呈現(xiàn)劑量依賴性。

在AD小鼠模型的治療設(shè)置中，LS雖未明顯改變臨床癥狀、皮膚厚度和TEWL，但改善了角質(zhì)層增生和表皮結(jié)痂等組織學(xué)表現(xiàn)，同時(shí)減少了局部淋巴結(jié)中IgE陽(yáng)性B細(xì)胞數(shù)量和IL-4水平。

預(yù)防治療效果更為明顯，LS能降低AD小鼠的臨床癥狀和組織學(xué)病變程度，減少淋巴結(jié)中效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量和IL-13水平。

總體而言，副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母的混合微生物培養(yǎng)物（LS）具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎活性，對(duì)AD的預(yù)防效果優(yōu)于治療效果，為AD的早期局部微生物組調(diào)節(jié)干預(yù)提供了潛在策略。

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